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丙型肝炎病毒检测分型技术

      丙型肝炎是一种主要经血液传播、由丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus, HCV)感染引起的疾病。HCV慢性感染可导致肝脏慢性炎症、坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌(HCC),对患者的健康和生命危害极大,已成为严重的社会和公共卫生问题。

      HCV是一种RNA病毒,其核酸是单股、线性、正链RNA。由于HCV RNA复制所依赖的聚合酶缺乏校正功能,HCV基因组呈现高度异质性,目前可分为6个基因型及不同亚型,按照国际通行的方法,以阿拉伯数字表示HCV基因型,以小写的英文字母表示基因亚型(如1b、2a、3b等)。不同HCV基因型感染者的临床表现、肝病严重程度及慢性化病程进展均有差异,抗病毒治疗的方案和效果也不同。因此检测HCV基因型有助于指导判断治疗的难易程度、转归和制定个体化抗病毒治疗方案。

      本试剂盒针对HCV-RNA基因组,设计特异性引物和探针,采用一步法RT-PCR体外扩增法结合荧光探针检测技术,检测中国国内人丙型肝炎病毒(HCV)常见基因型别1b、2a、3a、3b和6a。


      一步法RT-PCR即逆转录和PCR在一个共同的体系中进行。一步法RT-PCR在处理大量样品时易于操作,因为在cDNA合成和扩增之间不需要打开管盖,有助于减少残余污染,简化了实验操作步骤。而且,一步法RT-PCR逆转录所得的cDNA全部用于PCR扩增,故可以得到更高的灵敏度。基于以上特点,一步法RT-PCR在临床检测应用中将有显著的优势。

      荧光PCR技术在引物特异的基础上采用模版序列特异的荧光探针从而进一步提高的检测信号的特异性;反应中每扩增一个特异产物只释放一个分子的荧光染料,仪器检测的是特异扩增的结果,非特异产物对检测信号没有影响,有效提高检测的专一性。有多种不同波长的荧光基团对可供选择,使得荧光PCR技术可以实现在同一管内检测多个基因位点,降低成本也提高效率和准确性。本项目恰好充分利用了荧光PCR技术的优点,针对HCV常见基因型设计型特异探针,各探针标记不同的荧光染料,在不同波长检测,从而达到分型的目的。


 

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